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冠狀病毒的診斷檢測是通過擴增SARS-CoV-2特異性序列來檢測病毒核酸,SARS-CoV-2是由*不穩定且易于降解的RNA組成,在這樣的情況下,在錯誤或不達標的環境條件中存儲病毒樣品會導致假陰性,再者微生物的存在也會污染病毒樣品。由于這些原因,各國疾控中心都將冠狀病毒的正確收集和保存作為診斷的較重要步驟。
中科檢測可開展針對流感病毒、腸道病毒、冠狀病毒、皰疹病毒等病毒保存液病毒滅活效果檢測,病毒保存液檢測可針對不同保存溫度、不同保存時間等不同條件下的病毒活性及病毒滅活率。
病毒保存液檢測方法
1、病毒保存液檢測對象
毒株:甲型流感病毒HINI (VR- 1469)
細胞:MDCK細胞
2、病毒保存液檢測步驟:
1)取樣品病毒保存液(非滅活型) 9.8mL,加入0.2mL病毒原液混勻,分裝若干測試液,存至要求溫度;
2)保存至對應天數后取出測試液,檢測病毒滴度;
a)10倍倍比稀釋測試液;
b)將稀釋液加入含生長至單層的MDCK細胞的96孔細胞培養板上,并設置正常對照組,加等量培養液;
c)置于35'C、5%CO2的培養箱中孵育60 min后棄去上清液,加入雙抗400 IU/mL的維持培養液繼續孵育3~5天,每天觀察細胞增長狀況;
d)當接種病毒的MDCK細胞出現變圓或縮小等病變現象時,記錄產生細胞病變的情況;
e)根據Reed-Muench公式計算半數感染量TCID50。
中科檢測可針對病毒保存液檢測的不同保存溫度、不同保存時間等不同條件下的病毒活性及病毒滅活率。